El Producto de Excreción de la Shigella dysenteriae (PESdy) Induce Muerte Celular en Larvas de Pez Cebra (Danio rerio): Marcaje in vivo con Naranja de Acridina y Bromuro de Etidio (NA/BE)

DOI : http://dx.doi.org/10.4067/S0717-95022013000400005
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Álvarez, M.; Urbina, G. & Perdomo, L.

Resumen

En el campo de los estudios de toxicidad aguda inducida por agentes bacterianos, las toxinas Shiga resultan relevantes debido a la severidad de las enfermedades extra-intestinales que causan. Numerosos estudios han de- mostrado que la toxina Shiga induce la apoptosis en diferentes tipos de células, sin embargo, este importante proceso ha sido poco estudiado en modelos experimentales in vivo. En este estudio, fueron evaluados los efectos del productos de excreción de Shigella dysenteriae (PESdy), sobre estadios larvarios de pez cebra (Danio rerio), un modelo animal con muchas ventajas sobre otros modelos experimentales in vivo utilizados tradicionalmente. Tanto la recolección de los hue- vos y larvas de pez cebra, así como la obtención del producto de la excreción, se realizaron de acuerdo a los estándares de laboratorio. Poblaciones larvarias, fueron tratadas con distintas soluciones; pura y diluidas, 10-1, 10-2, 10-3 , 10-4 and 10-5 v/v de PESdy. La muerte celular in vivo, usando naranja de acridina (NA) y bromuro de etidio (BE) fue evaluada. El efecto del PESdy, se expresó como dependiente de la concentración y del tiempo de exposición. La población de larvas sobrevivientes, presentaron curvatura troncal en un 10%, en relación a los controles. La necrosis se puso en evidencia a través de la opacidad de las larvas después de 24 h. El uso de NA/BE reveló un patrón de distribución de la fluorescencia en verde y naranja en larvas sobrevivientes al tratamiento. Una gran población de células muertas, alrededor de la región anal y caudal, se ponen en evidencia por la presencia de núcleos de naranja en mayor número que en los controles. Los resultados apoyan la aplicación de la coloración NA/BE en modelo experimental de pez cebra, para la evaluación de la acción tóxica de nuevas moléculas y nuevos productos de excreción bacterial con potencial terapéutico.

PALABRAS CLAVE: Pez cebra (Danio rerio); Shigella dysenteriae; Apoptosis; Naranja de Acridina; Bromuro de Etidio

Como citar este artículo

ÁLVAREZ, M.; URBINA, G. & PERDOMO, L. Excretion product of Shigella dysenteriae (SdyEP) induced cell death in early larval stage of zebrafish (Danio rerio): Acridine orange and ethidium bromide (AO/EB) in vivo Staining. Int. J. Morphol., 31(4):1175-1180, 2013.