Caracterización Morfológica, Génica y Protéica en la Diferenciación de Células Madre Embrionarias de Ratón a Células Pancreáticas Tempranas

DOI : http://dx.doi.org/10.4067/S0717-95022013000400044
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Vázquez-Zapién, G. J.; Sánchez Monroy, V.; Chirino López, Y. I., & Mata-Miranda, M. M.

Resumen

Debido al auge de la medicina regenerativa, las Células Madre (SC) representan una fuente de reemplazo celular para cualquier tejido, decidiendo emprender este trabajo de investigación con el objetivo de diferenciar células madre embrionarias de ratón (mESC) a células pancreáticas tempranas, realizando su caracterización génica y morfológica. Primeramente se cultivaron y arrestaron en su ciclo celular fibroblastos embrionarios de ratón (MEF) con mitomicina, posteriormente se expandieron las mESC y se sometieron a un protocolo de diferenciación de 21 días hacía células pancreáticas tempranas, evaluándose durante la diferenciación su morfología y expresión relativa de los genes sox-17, pdx-1, ins-1 e ins-2, determinando además la producción de las proteínas insulina y glucagón mediante inmunocitoquímica y citometría de flujo. Se obtuvieron cuerpos embrionarios (EBs) a partir de mESC, con características morfológicas diferentes de acuerdo a su diferenciación, los cuales expresaron genes de la línea germinal endodérmica (sox-17 y pdx-1) a los días 0, 11 y 17 de diferenciación, gen inductor del desarrollo embrionario pancreático (pdx-1) al día 11 de diferenciación y, genes de expresión pancreática (ins-1 e ins-2) a los días 17 y 21 de diferenciación. Finalmente se detectó la producción de proteínas insulina y glucagón en los EBs al día 21 de diferenciación. Se logró diferenciar mESC. El análisis morfológico evidenció cúmulos celulares tridimensionales correspondientes a EBs. Con el análisis de los patrones de expresión génica, se distinguieron inicialmente células con características genéticas de endodermo y posteriormente a partir del día 17 células pancreáticas tempranas, las cuales al día 21 de diferenciación expresaron las proteínas insulina y glucagón. Los resultados anteriores sugieren la necesidad de continuar protoco- los de diferenciación para determinar el comportamiento de ESC sometidas a diferenciación y su posible uso terapéutico al implantar células diferenciadas y especializadas en modelos animales.

PALABRAS CLAVE: Células madre; Stem cell; Diferenciación de células madre; Células diferenciadas; Cuerpos embrionarios; Células productoras de insulina.

Como citar este artículo

VÁZQUEZ-ZAPIÉN, G. J.; SÁNCHEZ MONROY, V.; CHIRINO LÓPEZ, Y. I. & MATA-MIRANDA, M. M. Morphological, genetic and protein characterization in the differentiation of embryonic stem cells to early pancreatic cells. Int. J. Morphol., 31(4):1421- 1429, 2013.